Et L'Oie En Utilisant Le Procédé D'Identification De Produits De PCR

< p > < strong > 1 Introduction < / strong > < / p >

< p > < a href = "http: / / www.sjfzxm.com / News / index_c.asp" > < / a > plume se réfère à une croissance de canards, oies, de l'abdomen de duvet Lu fleur, est un type de fibres, de protéines animales sur le duvet, de coton, de la laine et soie dans Quatre naturel de matériau d'isolation thermique, le meilleur [des propriétés de rétention de chaleur - 1].

Toutefois, à l'heure actuelle, le niveau de prix sur le marché de produits différents, il y a beaucoup de plume de faux produits frelaté [2 - 3], à ce stade, de plumes de la présence sur le marché, la quantité de matière première inférieure avec un remplissage de marquage et ne correspond pas à la réalité, d'encombrement n'est pas qualifié, la propreté de non - conformité, etc. [4], dans laquelle un mode commun un matériau inférieur: les produits de faux d'une fibre acrylique constituée de coton, de la laine brute de fabrication de produit en duvet, pour écraser de poils (voler les produits de fabrication de fil) [5].

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< p > dans l'industrie de détection, procédé d'identification de duvet principalement à base de GB / t 10288 - 2003 "méthodes de test et de plume" et FZ / standard de l'industrie 80001 t - 2002 "procédé de test de plume et lavé la fourniture, le procédé est réalisé par un microscope optique, à L'aide de l'observation visuelle de la microstructure de l'échantillon, et le contraste standard sur canard, description et texte des icônes de l'OIE et autres oiseaux de duvet de classer l'identification de caractéristiques de Microstructure.

Le procédé pour tester une exigence de personnel, la subjectivité, facile à produire à l'aide de jugement, et une description de texte simple, l'absence de véritable de l'échantillon de référence, des difficultés pratiques d'inspection du travail [6].

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< p > Cette étude le canard < a href = "et http: / / www.sjfzxm.com / News / index_c.asp" > < / a > oie de produits de PCR fluorescents et procédés d'identification, procédé d'identification de la période classique et en combinaison, d'améliorer l'objectivité et l'identification et la précision.

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< p > < strong > 2 < / strong > de matériaux et de procédés < / p >

< p > 2.1 < / p > de matériaux et de réactifs

< p > et < / p > 2.1.1 de l'essai de matériaux

< p > édredon utilisés dans l'essai, de l'oie, et d'autres produits en provenance de l'achat sur le marché.

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< p > et < / p > 2.1.2 réactif

< p > Le Thiocyanate de Guanidine, de la Polyvinylpyrrolidone (PVP K-40 K-40), Sodium dodécyl sulfate (SDS), beta - mercaptoéthanol pour Amersco de produits de l'entreprise, de saumon d'ADN de sperme pour Sigma de produits de l'entreprise, de l'ADN polymérase de Taq et 2 × Premix ExTaq Enzyme achetés à partir de génie biologique po (Dalian) Co., Ltd, de l'amorce et de la sonde (tableau 1) par Shanghai Co., Ltd est né des services de génie biologique de synthèse.

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< p > 2.2 Méthode < / p >

< p > 2.2.1 de l'extraction d'ADN < / p >

＜p＞　　挑取带毛囊的羽绒，剪取毛囊部位约0.03g样品，加入3mL 2% SDS溶液[2% SDS，50mmol/L Tris·Cl(pH值8.0)，20mmol/L EDTA(pH值8.0)]，65℃水浴1.5h，不时振荡;12000r/min离心5min，取上清;加入3mL羊毛提取液[4mol/L异硫氰酸胍，0.3mol/L氯化钠，4% PVPK-40，50mmol/L Tris·Cl(pH值8.0)，20mmol/L EDTA(pH值8.0)]及60μLβ-巯基乙醇，65℃水浴4.5h，不时振荡;12000r/min离心5min，取上清，加入等体积酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，颠倒混匀，12000r/min离心10min;取上清，加入1μL 10mg/mL鲑精DNA，1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH值5.2)及等体积异丙醇，-20℃沉淀过夜，12000r/min离心15min收集沉淀;小心倒去上清，用70%乙醇洗涤二次，风干;取50μL去离子水溶解沉淀。

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< p > 2.2.2, système de détection de fluorescence par PCR d'établir < / p >

< p > 2.2.2.1 édredon de velours, spécifique de la conception d'amorces fluorescentes < / p >

< p > selon les canards, canards de barbarie, Anas poecilorhyncha, des oies, Hongyan, du poulet, des pigeons, les cailles, de la conception d'amorces et de sondes de séquences de gène ADNR mitochondrial 12s l'Amérique du Nord, la Turquie, sur la base de l'effet des amorces et des sondes spécifiques, et de veiller à ce que des amorces et des sondes de sites de liaison au niveau de leurs ancêtres, les canards de canard et de taches bec de canard colvert séquence consensus, les oies sont compatibles avec ses Hongyan séquences ancestrales.

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< p > 2.2.2.2 < a href = "http: / / www.sjfzxm.com / News / index_c.asp" > < / a > l'amplification PCR et le résultat du jugement < / p >

< p > du système de réaction (20 μl): 10 µm à 2 × Premix ex Taq l, chaque amorce aval de 0,2 μ mol / L, une sonde de 0,1 µmol / L, la matrice d'ADN de 4 µl.

Procédures de réaction: 95 ° C pendant 30 à 60 ° C et 95 ° C, 5S, 34s, 40 cycles.

Le résultat de l'évaluation: la valeur CT ≤ 35, lorsque le résultat de détermination est positif; valeur > 35 CT peut être le résultat de la détermination est négatif.

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< p > 2.2.2.3 procédé spécifique et la limite de détection d'essai < / p >

< p > pour les canards, canards de barbarie, d'édredon, oies, oie, poulet, cailles, de bovins, porcins, ovins, caprins, Buffalo, de chevaux, de lapin et de souris, de saumon de l'ADN de sperme pour modèle d'amplification, à l'aide de duvet, des amorces et des sondes spécifiques de fluorescence de velours de réaction PCR, de manière spécifique, procédé de vérification; et, pour 100 ng ng, 10ng, 100pg, 10pg, modèle de fluorescence 1pg PCR afin de détecter la limite de détection, chaque gradient de faire trois parallèles.

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< p style = "p" class = "margin-top: 0pt; margin-bottom: 0pt" > < span style = "boire:" Times New Roman "; la taille de la police: 10 PT; mso-spacerun:" oui "> < font face =" Times New Roman "> {page_break} < / FONT > < / span > < / p >

< p > < / p > 2.2.3 de l'échantillon à tester

< p > sélectionne un édredon 18 produits par l'étape d'extraction de l'ADN, 1.2.1, de réaction PCR d'échantillons par fluorescence 2.2.2, par l'utilisation de voir tableau 2.

En raison de la plume d'oie sur le marché de produits plus rare, d'acheter des produits à l'oie, dans un échantillon de test ne contient pas de produits de velours.

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< p > < strong > 3 Résultats < / strong > < / p >

< p > 3.1, procédé d'extraction de produits et d'établir en raison de l'ADN de Duvet Duvet Duvet Duvet d'oie et de produits contenant du visible à l'oeil nu évident de follicules pileux, de découpage et de sites de test dans le follicule pileux édredon de velours, l'utilisation de SDS - Thiocyanate de Guanidine - beta - [7] d'extraction à base d'alcool à faible densité de duvet et l'ADN de velours.

200 ng de 20ng et concentration de l'ADN extrait, CT de fluorescence de l'ADN et de la réaction PCR de plumes de la valeur de l'ADN de velours sont respectivement de 25 et 26 (Figure 1), montrent que l'utilisation de ce procédé d'extraction de l'ADN de satisfaire les exigences de qualité de PCR.

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< p > 3.2 approche les résultats d'essai à spécificité < / p >

< p > les résultats, de la fluorescence des amorces spécifiques de plumes de canards, canards de barbarie et ne peut amplifier l'ADN de plumes, et d'autres espèces d'ADN que l'amplification spécifique de l'OIE; spécificité amorces fluorescentes uniquement des oies et amplification de l'ADN et de l'ADN de velours et d'autres espèces que l'amplification spécifique d'amorces spécifiques, montre que la bonne.

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< p > 3.3 de la limite de détection de résultats de test < / p >

< p > résultat, l'utilisation de ce procédé d'extraction de matières premières et de 100% 100% plumes oie de matières premières d'ADN par PCR d'ADN lors de la réaction de la limite de détection (saumon 10ng contenant l'ADN de sperme).

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< p > 3.4 de l'échantillon d'essai de détection de résultats < / p >

< p > de détection indique que l'échantillon de constituants de 18 duvet peut être détectée de l'ADN de canard, et non la détection d'ADN et les composants de l'oie, la détection de produits expressément la composition identique (tableau 1).

Les canards de barbarie indépendamment de l'utilisation spécifique d'amorces et des amorces spécifiques de la fluorescence de la réaction de PCR, 18 de l'échantillon est détectée de l'ADN de composants de canards, canards de barbarie de composition d'ADN non détectée, indiquant que 18 produits proviennent de la maison de Plumes Duvet.

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< p > < strong > < / strong > 4 discuter < / p >

< p > l'ADN de fibres animales principalement dans les follicules pileux du site, en fait il y a quelques cheveux dans l'ADN mitochondrial [8], étant donné que les produits contenant des follicules pileux visible à l'oeil nu, de prendre position sur les follicules pileux dans le processus de test, à l'aide de SDS - isothiocyanate de Guanidine - beta - éthanol, procédé d'extraction de l'ADN Thiol [7]. L'extraction d'ADN, dissoudre sensiblement les parties tige capillaire de follicules pileux, de produire une large gamme de fracture à travers l'échantillon test de détection, montrent que le procédé d'extraction de l'ADN de velours édredon et couronnée de succès.

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< p > le test de sélection de séquences d'ADNR 16S mitochondrial comme site cible de conception d'amorces, une amorce de conception doivent être pris en considération lors de la conception d'amorces qui peut couvrir des souches différentes de canards oies partout dans le monde.

En théorie, les canards, oies et leurs ancêtres pendant une longue période de temps pour la différenciation de canard, de différenciation temporelle de chaque souche de séquence d'un segment d'ADN de l'oie, tant dans son ancêtre de canards et oies dans un conservateur est garantie, dans toutes les souches de conservateur d'acclimatation, de manière à garantir dans la théorie de l'amorce peut détecter tous les produits du système des canards et oies.

Selon des rapports et des documents de Wikipédia [9 - 10], à l'exception de Canard Branchu (cairina moschata, communément connu sous le nom de canards, canards de canards colverts) originaires de canard siffleur (Anas Platyrhynchos) et canard spot bouche (A. Poecilorhyncha), et par l'introduction de canard de barbarie est En Amérique centrale et du Sud.

Oie domestique par les oiseaux sauvages de l'acclimatation oies par formation à long terme, dont la Chine < / p >

< p > des oies (anser anser cygnoides par cygnoides) d'acclimatation, l'Europe des oies par Grey Goose (A.anser) d'acclimatation.

Par conséquent, les canards, canards de barbarie, de télécharger les oies de leurs ancêtres pendant le téléchargement de variétés similaires, de la conception d'amorces, une amorce de la base de données NCBI par alignement avec la spécificité de test, montre une bonne spécificité.

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< p > l'identification de types de fibres, principalement dépend de la microscopie, le procédé est simple, mais la dépendance excessive à l'égard de la qualité et de l'expérience des travailleurs, la subjectivité trop fort, le procédé de recherche et de développement peut être utilisé comme un puissant auxiliaire et procédé d'identification de microscope classiques, et d'améliorer la précision et l'objectivité de l'identification de la plume de velours.

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